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一）整套试剂及用品
鉴定生化反应的8种试剂（表1）、8瓶0.85%无菌生理盐水、1瓶1McFarland的浊度管、8支一次性吸管。
二）生化管的使用方法
开启西林瓶前，用75%酒精棉消毒西林瓶表面，在无菌条件下，按铝盖上的箭头方向打开铝盖，撕开铝盖，打开西林瓶
胶塞（如左图）。所有的西林瓶在使用后均高压灭菌后方可弃去。
三）蜡样芽胞杆菌生化鉴定盒的详细使用方法
蜡样芽胞杆菌为革兰氏阳性大杆菌，宽度在1µm或1µm以上，芽胞呈卵圆形，不突出菌体，多位于菌体中央或稍偏于一端。
能产生卵磷脂酶和酪蛋白酶，不发酵甘露醇和木糖。在MYP平板上为粉红色菌落，周围有粉红色的晕；在酪蛋白琼脂上菌落周
围有透明圈。本菌在肉汤中生长浑浊，常微有菌膜或壁环，振荡易乳化，在普通琼脂平板上生成的菌落不透明、表面粗糙、似
毛玻璃状或融腊状、边缘不齐。
将待试品用10倍梯度稀释法稀释至合适的浓度，MYP平板分离，37℃培养12～20小时，将疑似蜡样芽胞杆菌的新鲜菌苔
置于无菌生理盐水中，以1 McFarland的浊度管为标准对照，制备成1McFarland ( 约3.0×108cfu/mL )菌悬液，往每种微量生化
管内滴加2滴（约0.06mL）菌悬液。将已接种的西林瓶再套上胶塞，一般采用全加塞（如右图左两瓶所示），特殊情况在下表
注明采用半加塞（如右图右两瓶所示），直立于内托的凹槽内（如图2），或放置于合适的瓶架中，于35－37℃培养箱中培养，
结果观察见表1。
注意：如有特殊的接种方式或培养时间，请详见每种生化鉴定管附带的使用说明。
表1
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产品名称
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结果判定
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培养时间
（小时）
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使用说明
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|
阳性
|
阴性
|
|||
|
葡萄糖(厌氧)
|
黄色
|
绿色
|
24－48
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加灭菌液体石蜡3～4滴覆盖表面。
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H2O2
|
剧烈起泡
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不明显
|
--
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直接滴加在玻片的新鲜菌苔涂片上
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|
半固体琼脂
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穿刺线浑浊
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穿刺线清晰
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18－24
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挑取新鲜菌苔穿刺接种后置37℃培养箱中培养。
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|
硝酸盐（还原）
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深红色
|
略带
淡粉红色
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18－24
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西林瓶半加塞（如图2右两瓶所示）培养后加硝酸盐还原试剂甲、乙液各2滴，混匀，立即观察结果。
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|
溶菌酶耐性
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肉汤浑浊
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肉汤清晰
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24-－48
|
取菌悬液一环，接种于溶菌酶肉汤中，37 ℃下培养。
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|
甘露醇
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黄色
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紫色
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18－24
|
|
|
葡萄糖磷酸盐胨水(VP)
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红色
|
不变色
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48
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西林瓶半加塞（如图2右两瓶所示）培养后依次加入8滴VP试剂甲液及4滴乙液，混匀，再培养10－20分钟观察结果。
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|
蛋白质毒素结晶体染色液
|
红色结晶体
|
无红色
结晶体
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参见表3下面的文字表述。
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备注：本鉴定盒是按照环凯产品目录中的品种成份从左到右的顺序摆放。
四）蜡样芽胞杆菌的生化分型和鉴定特征 （只供参考）
1. 蜡样芽胞杆菌可根据对柠檬酸盐利用、硝酸盐还原、淀粉水解、V-P反应、明胶液化性状的试验，将该菌分成不同的型别。
见表2。
表2 蜡样芽胞杆菌生化分型
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型别
|
硝酸盐还原
|
柠檬酸盐利用
|
淀粉水解
|
明胶液化
|
V-P反应
|
|
1
|
＋
|
＋
|
＋
|
＋
|
＋
|
|
2
|
＋
|
－
|
＋
|
＋
|
＋
|
|
3
|
＋
|
＋
|
－
|
＋
|
＋
|
|
4
|
－
|
－
|
＋
|
＋
|
＋
|
|
5
|
－
|
－
|
－
|
＋
|
＋
|
|
6
|
－
|
＋
|
－
|
＋
|
＋
|
|
7
|
－
|
＋
|
＋
|
＋
|
＋
|
|
8
|
＋
|
－
|
－
|
＋
|
＋
|
|
9
|
＋
|
－
|
－
|
＋
|
－
|
|
10
|
＋
|
－
|
＋
|
＋
|
－
|
|
11
|
＋
|
＋
|
＋
|
＋
|
－
|
|
12
|
＋
|
＋
|
－
|
＋
|
－
|
|
13
|
－
|
－
|
＋
|
－
|
－
|
|
14
|
－
|
＋
|
－
|
＋
|
－
|
|
15
|
－
|
＋
|
＋
|
＋
|
－
|
注：“＋” 90％～100％的菌株阳性；“－” 90％～100％菌株阴性
2. 本菌与其他类似菌的鉴别。见表3。
表3 蜡样芽胞杆菌与其他类似菌的鉴别
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特征
|
蜡样芽胞杆菌
|
苏云金芽胞杆菌
|
蕈状芽胞杆菌
|
炭疽芽胞杆菌
|
巨大芽胞杆菌
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|
革兰氏染色
|
+a
|
+
|
+
|
+
|
+
|
|
过氧化氢酶
|
＋
|
＋
|
＋
|
＋
|
＋
|
|
动力
|
±
|
±
|
－
|
－
|
±
|
|
硝酸盐还原
|
＋
|
＋
|
＋
|
＋
|
－
|
|
酪蛋白分解
|
＋
|
±
|
±
|
－/＋
|
±
|
|
溶菌酶耐性
|
＋
|
＋
|
＋
|
＋
|
－
|
|
卵黄反应
|
＋
|
＋
|
＋
|
＋
|
－
|
|
葡萄糖利用（厌氧）
|
＋
|
＋
|
＋
|
＋
|
－
|
|
V-P试验
|
＋
|
＋
|
＋
|
＋
|
－
|
|
甘露醇
|
－
|
－
|
－
|
－
|
＋
|
|
溶血
|
＋
|
＋
|
＋
|
－/＋
|
－
|
|
根状生长
|
－
|
－
|
＋
|
－
|
－
|
|
蛋白质毒素晶体
|
－
|
＋
|
－
|
－
|
－
|
注：“＋” 90％～100％的菌株阳性；“－” 90％～100％菌株阴性；“±” 大多数菌株阳性。
本菌在生化性状上与苏云金芽胞杆菌极为相似，但后者可藉细胞内产生蛋白质毒素结晶体加以鉴别。其方法如下：取经
30±1℃培养24±2h并于室温放置3～4天的营养琼脂（022022，适用于芽胞杆菌蛋白质毒素结晶体的形成）培养物少许于载
玻片上,滴加蒸馏水混匀并涂成菌膜。经自然干燥,微火固定后,加甲醇作用30秒后倾掉,再通过火焰干燥,于载玻片上滴满0.5％
碱性复红液,放火焰上加热微见蒸气(勿使染液沸腾)后持续1.5分钟,移去火焰,更换染色液再次加温染色30秒，倾去染液用自
来水彻底清洗、晾干后油镜镜检。观察有无游离芽胞和染成深红色的菱形、正方形或其它性状的蛋白质毒素结晶体（如发现游离
芽胞形成的不丰富,应将培养物置室温2～3天再行检查），如有即为苏云金芽胞杆菌，蜡样芽胞杆菌检查为阴性。