一)整套试剂及用品
鉴定生化反应的11种试剂(表1)、10瓶0.85%无菌生理盐水、1瓶0.5 McFarland的浊度管、10支一次性吸管。
二)生化管的使用方法
开启西林瓶前,用75%酒精棉消毒西林瓶表面,在无菌条件下,按铝盖上的箭头方向打开铝盖,撕开铝盖,打开西林瓶胶塞(如左图)。所有的西林瓶在使用后均高压灭菌后方可弃去。
三)阪崎肠杆菌生化鉴定盒的详细使用方法
阪崎肠杆菌为具有周身鞭毛,兼性厌氧的,不产生芽孢的革兰氏阴性杆菌。产生黄色色素,发酵蔗糖,鼠李糖,蜜二糖和苦杏仁苷。氧化酶阴性。从可疑显色培养基平板转接TSA平板分离培养,挑取菌苔置于已配备的无菌生理盐水,利用0.5 McFarland的浊度管将菌悬液制备成0.5McFarland ( 约108cfu/mL ),用吸管吸取2滴(约0.06mL)菌悬液接种于每种微量生化管内。将已接种的西林瓶再套上胶塞,一般采用全加塞(如右图左两瓶所示),特殊情况在下表注明采用半加塞(如右图右两瓶所示),直立于内托的凹槽内(如右图),或放置于合适的瓶架中,
于下述培养温度和培养适合时间,结果观察见表1。
注意:如有特殊的接种方式、培养时间或培养方式,请详见每种生化鉴定管附带的使用说明。
表1
产品名称
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结果判定
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培养温度,时间
(小时)
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使用说明
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阳性
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阴性
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山梨醇
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黄色
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紫色
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30℃培养20-24小时
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蜜二糖
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鼠李糖
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蔗糖
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苦杏仁苷
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黄色
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蓝绿色
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30℃培养20-24小时
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氧化酶试纸
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红色
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不变色
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立即
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用玻棒挑取新鲜培养物于试纸表面,观察菌落颜色。
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西蒙氏枸橼酸盐
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生长
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不生长
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36±1℃培养24-48小时
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西林瓶半加塞(如图2右两瓶所示)用接种针挑取新鲜菌苔在斜面上划“之”字形接种,竖立培育。
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鸟、赖氨酸脱羧酶、
精氨酸双水解酶
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试验管蓝绿色,
对照管变黄
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试验管与对照管均变黄
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30℃培养20-24小时
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每株被检菌应同时接种氨基酸对照管一支,并加灭菌液体石蜡5-8滴覆盖培养基表面。培养18-24小时,未见阳性结果,继续培养4天,再做最终结果判定。
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备注:本鉴定盒是按照环凯产品目录中的品种成份从左到右的顺序摆放。